AML-12-LUC(小鼠正常肝细胞(LUC标记)) 

 细胞筛选:

该细胞为已经稳定转染LUC的细胞,随细胞传代次数的增加,其LUC荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。

细胞经过20μg/ml嘌呤霉素筛选,平时培养可维持10μg/ml嘌呤霉素

二、细胞培养操作

1)复苏细胞:  以下细胞培养冻存处理仅供参考 ,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻 ,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件 下离心3 min ,弃去上清液 ,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶    中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中 ,加入约4 mL完全培养基 ,培养过夜) 。第三天换液并检查细  胞密度。

 2)细胞传代:  如果细胞密度达 80%-90% ,即可进行传代培养。 a、弃去培养上清 ,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液( 0.25%Trypsin-0.02%EDTA) 于培养瓶中 ,使消化液浸润所有细胞 ,将培养瓶置于   37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定) ,然后在显微镜下观察细胞消化情况 ,若细胞大部分 变圆并脱落 ,迅速拿回操作台 ,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离 心管中 , 1000 rpm离心5 min ,弃去上清液 ,补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中 ,置于培养箱中培养。

  3)细胞冻存: 待细胞生长状态良好时 ,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液 ,装入无菌离心管中 , 1000 rpm条件下离心4 min ,弃去上清液 ,用PBS清洗 一遍 ,弃尽PBS ,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液 ,使细胞密度5 × 106 ~ 1 × 107/mL ,轻轻混匀 ,每支冻存管冻存 1mL细胞悬液 ,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱 , 24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

 三、培养注意事项

 1 . 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好 ,培养液是否有漏液 、浑浊等现象 ,若有上述现象 发生请 及时和我们联系。

 2 . 仔细阅读细胞说明书 , 了解细胞相关信息 , 如细胞形态 、 所用培养基 、 血清比例、 所需 细胞因     子等 ,确保细胞培养条件一致 ,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题 ,责任由 客户自行承担。

3 . 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面 , 显微镜下观察细胞状态。 因运输问题 , 部分细胞由于温度 变化及 剧烈碰撞死亡破碎形成碎片 ,是正常现象。观察好细胞状态后 , 75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于

37℃培养箱放置 2-4h。

 4. 贴壁细胞可以消化 ,悬浮细胞直接混匀收集细胞 , 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min ,弃上 清。加

5 mL PBS 重悬细胞 ,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min , ,用新鲜的完全培养基重悬 细胞 ,并接种 到新的培养瓶或培养皿中 ,置于培养箱中进行培养。

 5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

 6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片 ,记录细胞状态 ,便于和我司技术部沟通 交流。 由 于运输的原因 ,个别敏感细胞会出现不稳定的情况 ,请及时和我们联系 , 告知细胞 的具体情况 , 以

便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

 7. 该细胞仅供科研使用。

 8. 备注 :运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞 ,请换用按照说明书细胞培 养条件新配

制的完全培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1: 2 传代 。

 9. 注意:  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个 10cm 皿。